Le proteine PPE di Mycobacterium tuberculosis, definite sulla base del motivo aminoacidico Pro-Pro-Glu, costituiscono una famiglia di 69 proteine polimorfiche ricche in glicina ritenute una probabile fonte di variabilità antigenica del bacillo tubercolare. Nel nostro laboratorio, nell’ambito di ricerche sul ruolo immunologico della proteina PPE44 nell’infezione tubercolare, è stato studiato l’eventuale polimorfismo e l’espressione del gene ppe44 in isolati clinici rappresentativi delle principali linee filogenetiche di M. tuberculosis. L’analisi PCR-RFLP mediante tre diversi enzimi di restrizione ha mostrato profili di digestione identici in tutti gli isolati; inoltre, la sequenza nucleotidica del gene ppe44 degli isolati non ha evidenziato mutazioni, ad eccezione di una sostituzione nucleotidica in posizione 581 (TTC→TCC, Phe→Ser) ritrovata unicamente negli isolati di genotipo Beijing. L’espressione di ppe44 negli isolati clinici, determinata mediante real-time RT-PCR quantitativa, normalizzata rispetto al gene di riferimento costitutivamente espresso sigA e confrontata con quella del ceppo di riferimento H37Rv, è risultata notevolmente variabile negli isolati clinici, rivelandosi paragonabile a quella di H37Rv in circa il 25% degli isolati, significativamente aumentata nel 60% degli isolati e diminuita nel rimanente 15%; gli isolati di genotipo Beijing hanno mostrato elevati livelli di espressione di ppe44. Tali risultati dimostrano quindi una sostanziale conservazione del gene ppe44 ed, al tempo stesso, una marcata variabilità dell’espressione di ppe44 tra gli isolati clinici. Per valutare se tale variabilità di espressione sia potenzialmente in grado di influenzare la risposta immunitaria dell’ospite, è stata determinata la risposta anticorpale anti-PPE44 in pazienti con tubercolosi in atto ed in soggetti sani con infezione tubercolare latente. E’ stata così dimostrata un’ampia variabilità nella risposta immunitaria verso PPE44 in pazienti con infezione tubercolare sia per quanto riguarda i titoli anticorpali, sia per quanto riguarda la proporzione dei soggetti rispondenti. Tali risultati suggeriscono che l’espressione differenziale dei geni ppe possa costituire una fonte di variabilità antigenica che può quindi avere implicazioni nella immunopatogenesi della tubercolosi.
Polimorfismo ed espressione del gene ppe44 in isolati clinici di Mycobacterium tuberculosis
RINDI, LAURA;GARZELLI, CARLO;
2007-01-01
Abstract
Le proteine PPE di Mycobacterium tuberculosis, definite sulla base del motivo aminoacidico Pro-Pro-Glu, costituiscono una famiglia di 69 proteine polimorfiche ricche in glicina ritenute una probabile fonte di variabilità antigenica del bacillo tubercolare. Nel nostro laboratorio, nell’ambito di ricerche sul ruolo immunologico della proteina PPE44 nell’infezione tubercolare, è stato studiato l’eventuale polimorfismo e l’espressione del gene ppe44 in isolati clinici rappresentativi delle principali linee filogenetiche di M. tuberculosis. L’analisi PCR-RFLP mediante tre diversi enzimi di restrizione ha mostrato profili di digestione identici in tutti gli isolati; inoltre, la sequenza nucleotidica del gene ppe44 degli isolati non ha evidenziato mutazioni, ad eccezione di una sostituzione nucleotidica in posizione 581 (TTC→TCC, Phe→Ser) ritrovata unicamente negli isolati di genotipo Beijing. L’espressione di ppe44 negli isolati clinici, determinata mediante real-time RT-PCR quantitativa, normalizzata rispetto al gene di riferimento costitutivamente espresso sigA e confrontata con quella del ceppo di riferimento H37Rv, è risultata notevolmente variabile negli isolati clinici, rivelandosi paragonabile a quella di H37Rv in circa il 25% degli isolati, significativamente aumentata nel 60% degli isolati e diminuita nel rimanente 15%; gli isolati di genotipo Beijing hanno mostrato elevati livelli di espressione di ppe44. Tali risultati dimostrano quindi una sostanziale conservazione del gene ppe44 ed, al tempo stesso, una marcata variabilità dell’espressione di ppe44 tra gli isolati clinici. Per valutare se tale variabilità di espressione sia potenzialmente in grado di influenzare la risposta immunitaria dell’ospite, è stata determinata la risposta anticorpale anti-PPE44 in pazienti con tubercolosi in atto ed in soggetti sani con infezione tubercolare latente. E’ stata così dimostrata un’ampia variabilità nella risposta immunitaria verso PPE44 in pazienti con infezione tubercolare sia per quanto riguarda i titoli anticorpali, sia per quanto riguarda la proporzione dei soggetti rispondenti. Tali risultati suggeriscono che l’espressione differenziale dei geni ppe possa costituire una fonte di variabilità antigenica che può quindi avere implicazioni nella immunopatogenesi della tubercolosi.I documenti in IRIS sono protetti da copyright e tutti i diritti sono riservati, salvo diversa indicazione.
